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病毒载体的刷新

病毒载体的刷新

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       基础研发明在的主要研究偏向为慢病毒(LV)载体刷新、腺病毒(ADV)容量刷新、腺相关病毒(AAV)血清型筛选、特异性启动子优化、以在体应用为焦点的CRISPR/Cas9手艺综合开发以及其它的生物学研究工具的研发。
  病毒载体是实现基因递送、完成基因操作的要害环节,因此,对病毒载体的刷新在研究和应用中有着特殊的主要职位。bti体育研发部针对病毒载体的刷新主要包括腺相关病毒的体内应用刷新,包括数十种靶向特异器官血清型、多种类型的AAV血清型文库、慢病毒和腺病毒的刷新。
  现在研究中常用的rAAV就是使用AAV2型基因组与差别的衣壳卵白团结爆发的混淆体病毒载体,一样平常标记为rAAV2/N (N为差别的衣壳血清型)。重组的病毒具有AAV2型的稳固表达和基因整合能力,同时获得了差别血清型的组织熏染嗜亲性(差别血清型衣壳外貌的特定结构位点决议了各自受体的特异性),体现出一定的器官靶向特异性。
  差别血清型AAV的组织嗜亲性  
 
血清型 组织亲和性
rAAV2/1 神经系统(高滴度顺向跨突触),肌肉,骨骼肌,心肌,平滑肌
rAAV2/2 神经系统,肌肉,肝脏,血管平滑肌,眼
rAAV2/3 肌肉,肝脏,肺,眼
rAAV2/4 神经系统,肌肉,眼,脑
rAAV2/5 神经系统,肺,视网膜,肝脏,滑膜枢纽
rAAV2/6 神经系统,肺,肌肉,心脏
rAAV2/7 肌肉,肝脏
rAAV2/8 神经系统,肝脏,胰腺,视网膜,脂肪组织
rAAV2/9 神经系统,心肌,肺,视网膜,皮肤,肌肉,脂肪组织
rAAV2-retro 神经系统(逆向非跨突触)
AAV-PHP.eB 跨血脑屏障(静脉注射)
AAV-PHP.S 全外周神经(尾静脉注射)
AAV-PAN 胰腺(腹腔注射)
AAV-LUNG 肺(尾静脉注射)
AAV-DJ 视网膜,肺,肾脏,体外熏染细胞
AAV-7m8 视网膜
AAV-ShH10Y 视网膜Muller细胞
AAV-Rh10 肝脏,血液,心脏,体外熏染细胞
AAV-Anc80L65 内耳、视网膜、骨骼肌、肝脏
AAV-SCH9 SVZ区神经干细胞
AAV-2M 视网膜
AAV-BR1 脑血管内皮细胞
AAV6-TM6 小胶质
  
  靶向特异器官AAV血清型熏染案例
  
  1、rAAV2-retro:神经系统(逆向非跨突触)
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  注射部位:小鼠BPN
  注射方法:脑定位注射
  载体:rAAV2-retro-hSyn-EYFP
  视察时间:4周
  
  2、AAV-PHP.eB:神经系统全脑表达(跨血脑屏障)
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  注射方法:尾静脉注射
  载体:pAAV-CMV-mScarlet-3FLAG & pAAV-CMV-mNeonGreen-3FLAG
  血清型:AAV-PHP.eB
  病毒滴度:1.10×1013VG/mL & 2.35×1013 VG/mL
  注射体积:200nl(注射病毒总量:1.5×1011 VG)
  视察时间:3周
  
  3、AAV-PAN:特异性熏染胰腺
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  4、AAV-LUNG:特异性熏染肺部

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  注射方法:尾静脉注射
载体:pAAV-CMV-mScarlet-3FLAG
血清型:AAV-LUNG
注射量: 2x1011 VG /只(滴度:1.49 x1013 VG/mL),
注射体积:200 uL
视察时间:3周

  
  5、AAV-DJ体外熏染293T细胞
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AAV-DJ(MOI=105)                                               AAV8(MOI=10
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