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逆转录病毒(Retrovirus),又称反转录病毒,是一种RNA病毒,其两头为长最后重复序列(LTR)。该病毒呈球形,有包膜,外貌有刺突,颗粒直径为100nm左右。逆转录病毒基因组有三个基因:Gag-编码病毒的焦点卵白;Pol-编码逆转录酶;Env-编码病毒的被膜糖卵白。
逆转录病毒包装及侵染细胞历程
逆转录病毒包装接纳三质;蛩闹柿O低尘傩邪,网络细胞作育上清,通过超速离心浓缩纯化和网络病毒。
滴度检测要领:定量PCR检测滋扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数。
滴度检测原理:逆转录病毒介导外源基因以逆转录方法整合进目的细胞基因组。
逆转录病毒基因表达时,需在逆转录酶的作用下首先将RNA逆转录成DNA,形成DNA整合前复合体,随后进入细胞核随机整合到宿主细胞DNA上,经由转录、翻译,完成基因的表达。
逆转录病毒包装及侵染机制
逆转录病毒特点
逆转录病毒的最大特点在于其特异性熏染破碎期细胞,这是由于只有当被熏染细胞处于细胞破碎时代,逆转录病毒DNA基因组才华接触到宿主细胞的遗传物质。
差别病毒的生物学特征较量
基于上述特征,逆转录病毒适用于干细胞相关的大宗研究,如神经干细胞研究、造血干细胞研究。体内应用时,逆转录病毒适用于研究成年新生神经元或胶质前体细胞的事情。
逆转录病毒应用案例
1、客户揭晓文章:Scientific Reports. (IF=4.122). Xiong Y S,et.al. (2015). Early treatment of minocycline alle-viates white matter and cognitive impairments after chronic cerebral hypoperfusion. [逆转录病毒, 卒中]
注射部位:小鼠侧脑室SVZ区
载体:pROV-EF1a-GFP
病毒载体:逆转录病毒
病毒滴度:1E+8cfu/mL
注射体积:1ul
2、应用案例:Nature.(IF=41.577).Yu YC,et.al. (2009).Specific synapses develop preferentially among sister excitatory neurons in the neocortex. [逆转录病毒, 发育]
注射部位:E12-E13小鼠胚胎
病毒载体:逆转录病毒
注射体积:1ul