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外泌体（Exosomes）是细胞渗透到胞外的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其巨细为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，含有富厚的内含物（包括核酸、卵白和脂质等），加入细胞间的分子转达 。外泌体普遍保存于细胞作育上清以及种种体液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等，同时也保存于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等 。
脑组织疏散要领简述：将脑组织剪成薄片，放入离心管中加上消化液举行消化，经水浴、重复轻轻上下倒置，再用移液枪中止缓慢吹吸至消化竣事 。随后加入作育基于消化液中，混匀，置于冰上 。再举行一系列的差速超速离心历程，包括除杂、滤膜过滤、超离等 。最后用PBS重悬外泌体，用重悬后的外泌体举行下面的透射电镜（TEM）、纳米粒径跟踪分子（NTA）和marker WB判断 。
图一 胞外囊泡渗透
所有的细胞都能渗透外泌体，可是差别细胞渗透的外泌体不管在数目上照旧在内含物中都具有很大的差别性，这也决议了每种外泌体所行使的功效纷歧样 。外泌体普遍加入细胞间物质运输与信息转达，调控细胞心理运动 。同时，外泌体具有抗原提呈、免疫逃逸、诱导正常细胞转化、增进肿瘤爆发和转移等作用；别的，外泌体还可以作为“自然的纳米粒子”来举行药物递送 。
外泌体相关数据库有哪些？
l exoRBase数据库网络和形貌人类血液外泌体中所有长的RNA，包括circRNA、lncRNA和mRNA 。
l EVpedia和Vesiclepedia数据库汇总了差别囊泡研究中发明的卵白、mRNA、miRNA、脂类等信息 。
l ExoCarta数据库主要收录了包括人、大鼠、小鼠、绵羊等几个物种的286个研究效果，涉及卵白、mRNA、miRNA、脂类等信息 。
样本预处置惩罚与外泌体疏散、生涯：
外泌体保存于人类或动物的种种体液中，我们可以选择差别的样原泉源举行相关的外泌体研究 。由于外泌体是泉源于细胞质膜内陷的含有脂质双分子层膜结构的多泡小体，漫衍于胞外基质 。为了获得高纯度的外泌体，必需确保有用去除所有的细胞碎片及其他不需要的杂质 。
1） 细胞作育上清 2）血浆/血清
3）尿液 4）脑脊液
5）卵泡液 6）宫腔液
7）胆汁 8）羊水
9）腹水 10）胸腔液
差别的实验样本收罗时需要注重的地方纷歧样，如细胞作育上清在网络样本前需换成无外泌体血清作育、血浆样本收罗时用一定不可用肝素抗凝管、尿液网络时需要加抑菌剂等 。
从生物体液中疏散外泌体的种种要领已经被开发出来，主要凭证外泌体的巨细、密度、免疫特征等特点举行操作 。疏散出高纯度的外泌体是我们后续开展外泌体研究的要害办法，现在差速超速离心是外泌体疏散要领中公认的“金标准”，也是高分文章中首选的疏散要领 。
外泌体提取在短时间（一周之内）使用，可以放在4度生涯，若是长时间生涯可以放在-20度或-80度生涯 。也可以将外泌体举行分装，划分放在-20度或-80度 。
外泌体检测要领：
外泌体疏散之后，需要经由一系列判断才华确定疏散的是外泌体 。判断要领从物理特征到外貌分子标记物，多角度举行判断 。
l 透射电镜判断法：简称TEM，适合外泌体双层囊膜超微结构视察，即通常为茶托型或一侧凹陷的半球形 。
图二 透射电镜
l 纳米颗粒跟踪剖析法：简称NTA，该要领能包管外泌体原始状态、检测速率快，检测后能提供外泌体粒径和浓度信息 。
图三 NTA
l Western blot分子标记物检测：外泌体标记卵白包括四跨膜卵白家族，如CD9、CD63和CD81；细胞质卵白，如肌动卵白（Actin）和钙磷脂团结卵白（Annexins）；加入生物功效的分子，如凋亡转接基因2互作卵白X（ALIX）、肿瘤易感基因101卵白（TSG101）、热休克卵白（HSP70、HSP90），以及细胞渗透的特异性卵白 。
图四 Western Blot（Tian Su et al., ACS Nano. 2019）
外泌体高通量检测
外泌体内含有与细胞泉源相关的卵白质和核酸，可以运输卵白质、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等进入受体细胞，加入细胞间通讯 。差别细胞泉源的外泌体所含有的卵白因素和RNA不太相同，可作为多种疾病的早期诊断标记物，也能作为靶向药物的载体举行疾病治疗 。
1. miRNA高通量测序
2. mRNA高通量测序
3. lncRNA芯片（人、小鼠）
4. ceRNA芯片（人、小鼠）
5. 卵白质组剖析（iTRAQ、TMT、Label-free）
外泌体标记或示踪：
l 亲脂染料标记外泌体：现在已揭晓的外泌体文章中，外泌体大多使用亲脂性染料举行标记，体内和体外都有较多应用 。亲脂性染料主要分为两大类，第一类是PKH67（绿色荧光）/PKH26（红色荧光），由于它们可以与外泌体的脂质双层膜稳固团结，以是染色效果较好，应用较普遍 。
图五 PKH67标记的外泌体与神经元之间相互作用（Juan Carlos Polanco et al., Acta Neuropathol Commun. 2018）
图六 PKH26标记的外泌体与MDA‐MB‐231细胞共作育（Mengyu Yu et al., Cancer Sci. 2019）
第二类是Di系列的亲脂性染料，包括DiI（橙色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）、DiR（深红色荧光） 。其中DiR的红外荧光可穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪 。
图七 DiI标记的外泌体通过静脉注射视察在体内器官的漫衍情形（Laura Otero-Ortega et al., J Cereb Blood Flow Metab. 2018）
l 慢病毒介导CD63-GFP表达：将外泌体的特定卵白CD63和绿色荧光卵白GFP的表达元件构建成质粒再包装到慢病毒中，随后用此慢病毒熏染细胞，使细胞渗透的外泌体带有绿色荧光 。
图八 用GFP标记的外泌体划分与SH-SY5Y、BV2和DRG细胞共作育（Rui Ren et al., Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2019）
图九 注射有CD63-GFP的外泌体后视察第1天(D1)和第5天(D2)的荧光（Rui Ren et al., Artif Cells Nanomed Biotechnol. 2019）
外泌体功效研究：
将标记的外泌体加入受体细胞作育基中，与受体细胞举行共作育，视察细胞的功效转变，如细胞增殖、迁徙与侵袭、细胞凋亡等；或者将外泌体注射入动物模子中，视察动物表型转变和检测动物相关指标 。
图十 DiR标记的外泌体静脉注射小鼠结肠癌肿瘤模子（Gaofeng Liang et al., J Nanobiotechnology. 2020）
图十一 外泌体的功效研究（Tian Fang et al., Nat Commun. 2018）
bti体育优势：
1) 实验周期短；
2) 价钱优惠；
3) 完善的售后效劳；
4) 项目履历富厚，乐成率险些100%；
5) 完整的一套实验效劳 。
我们提供的效劳：
1) 差速超速离心疏散；
2) 透射电镜拍摄（TEM）；
3) 纳米粒径跟踪剖析（NTA）；
4) Western Blot检测卵白标记物；
5) 外泌体高通量测序/芯片；
6) 外泌体标记或示踪；
7) 外泌体细胞功效检测；
8) 外泌体动物注射；
9) 外泌体动物模子验证等 。
