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CRISPR/Cas9

CRISPR/Cas9

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CRISPR/Cas9 是一种能够对基因组的特定位点举行准确编辑的手艺 。其原理是核酸内切酶Cas9卵白通过导向性RNA（guide RNA, gRNA）识别特定基因组位点并对双链DNA举行切割 ，造成DNA双链断裂 ，细胞使用非同源最后毗连(Non homologous End Joining ，NHEJ）或者同源重组（Homologous Recombination, HR）方法对切割位点举行修复 ，实现DNA水平基因敲除或准确编辑 。
　　CRISPR/Cas9 系统主要由两部分组成：
　　1. 单链的guide RNA（single-guide RNA ，sgRNA）
　　2. 有核酸内切酶活性的Cas9 卵白

 CRISPR基因敲除

　　以基因敲除为目的时 ，可以使用Cas9-sgRNA对DNA举行切割爆发双链断裂 ，随后细胞通过非同源最后毗连方法修复DNA ，在此历程中 ，将随机引入碱基的缺失或增添 ，基因爆发移码突变 ，导致编码基因的敲除 。　　

CRISPR基因编辑　　

　　以基因敲入或替换为目的时 ，需要借助同源重组原理 。CRISPR/Cas9系统中的Cas9-sgRNA在靶位点举行切割爆发DNA双链断裂 ，在模板DNA保存时 ，细胞通过同源重组方法修复DNA ，而模板DNA可以被人为设计成需要插入的基因或需要修复的基因 ，此时细胞编码目的基因 。

载体的选择（部分）

　　提供病毒载体的含Cas9卵白的单载和双载系统 ，可凭证目的基因序列设计多条gRNA ，载体带有多种荧光抗性标记 ，利便筛选 。
载体种别 编号 载体元件
CRISPR慢病毒单载体 H5070

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
H7072

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
H6825

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPRE
CRISPR慢病毒双载体 H5068

pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE
H5450

pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPRE
CRISPR  AAV单载系一切 H6941

pAAV-CMV-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
H5273

pAAV-hSyn-SaCas9-U6-sagRNA v2.0
CRISPR  AAV双载系一切 H6291

pAAV-CMV-EGFP-WPRE-U6-spgRNA v2.0

H12663

pAAV-U6-shRNA/spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPRE

H11012

pAAV-CMV-Luc2-WPRE-U6-spgRNA

 病毒载体效劳流程
 

  • 物种及目的基因名称
    病毒载体要求与选择
    其它特殊需求
  • Cas9病毒载体构建
    病毒包装与纯化
    滴度测定
  • 高滴度的病毒颗粒
    按条约提供比照病毒
    实验报告
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