在肿瘤生长历程中,细胞进入循环系统的能力是主要的研究工具。相关的信号通路主要可以分为控制细胞黏赞许控制细胞骨架。细胞的迁徙与侵袭主要与细胞骨架和黏附相关。肿瘤细胞侵袭和迁徙能力的改变通常接纳Transwell举行检测。细胞划痕也是测定肿瘤细胞运动特征的要领,由于无法区别正常增殖和迁徙细胞,应用有局限性。
Transwell实验
Transwell小室底层的一张有通透性的膜(一样平常为聚碳酸酯膜),将其安排于孔板中,小室内称上室,作育板内称下室。由于聚碳酸酯膜有通透性,下层作育液中的因素可以影响到上室内的细胞。应用Transwell可研究下层作育液中的因素对细胞生长、运动等的影响。
肿瘤迁徙实验:研究肿瘤细胞的迁徙能力或特定情形下肿瘤细胞的迁徙能力。常用8.0、12.0µm膜,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养因素高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反应肿瘤细胞的迁徙能力。
肿瘤侵袭实验:研究肿瘤细胞的侵袭能力或特定情形下肿瘤细胞的侵袭能力。在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶,模拟细胞外基质,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,细胞要把基质消化后才可以从上室迁徙到下室,计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。
目的: 研究目的基因过表达/滋扰对细胞侵袭、转移能力的影响
质料:正常细胞、比照慢病毒、过表达基因慢病毒
办法:细胞苏醒——Transwell铺板——细胞作育及染色——照相
划痕实验原理
肿瘤细胞在体外仍具有迁徙的能力。细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特征的要领之一。其借鉴体外细胞致伤愈合实验模子,在体外作育的单层细胞上,划痕致伤,然后较量差别实验组中肿瘤细胞迁徙的能力。
目的: 使用筛选的稳固株(转比照病毒、过表达基因病毒),通过对空细胞、比照稳转、目的基因稳转三组细胞举行划痕宽度举行统计学剖析,研究基因对细胞迁徙能力的影响。
质料:病毒和细胞株,目的细胞泉源于客户,稳固株bti体育构建
办法:细胞铺板——划线——细胞作育及照相——统计剖析